А.П.Безуглый, Г.Р.Валеева, А.М.Эйри
Российский научный центр восстановительной медицины и курортологии МЗ РФ, клиника «АНТА-Мед», Москва, Россия
При изучении процессов старения кожи многие исследователи обращают пристальное внимание на возрастные изменения морфологии и функций дермы, в частности на количественный и качественный состав коллагеновых волокон. Основными интерстициальными типами волокон являются коллагены 1 -го и 3-го типов. Коллаген 1-го типа составляет около 80% всего коллагена кожи взрослых, на долю коллагена 3 приходится 15%, остальные 5%, составляют в основном коллагены 4-го и 5-го типов. В процессе старения снижается синтез коллагена фибробластами. Истончение межклеточного матрикса больше связывают с естественным снижением синтеза коллагена 3, нежели коллагена 1. Можно считать актуальным вопрос о возможности применения средств, избирательно стимулирующих синтез коллагена 3-го типа.
Препарат ASC III разработан совместными усилиями фирм COSMOMED GmbH и отделением фармацевтической корпорации MERK в Дюссельдорфе. Активные ингредиенты препарата заключены в фосфолипидные везикулы-переносчики, размером 100 - 220 нм. Первая стадия исследований in vitro была посвящена выяснению возможного механизма действия ASC III.
Биоптаты нормальной человеческой кожи разделяли на эпидермис и дерму. Эпидермальные клетки, в основном кератиноциты, культивировали с добавлением ASC III, затем, после трех пассажей, культуру уже не содержащую ASC III, добавляли к культуре фибробластов. После инкубации культуру фибробластов обрабатывали моноклональными антителами к коллагену 3. В результате данных исследований можно предположить, что ASC III, добавленный к культуре кератиноцитов человека, стимулирует выработку медиаторов, которые специфически индуцируют фибробласты на выработку коллагена 3.
Следующая серия экспериментов была посвящена изучению непосредственного действия ASC III на фибробласты. Фибробласты получали из кожных участков, удаленных при хирургических операциях. 10 тысяч фибробластов высевали в 0,4 мл среды, далее добавляли ASC III и инкубировали в течение 72 часов. После инкубации к культуре добавляли моноклональные антитела к коллагену 3. Качественное определение комплексов антитело/коллаген 3 проводили при помощи мышиного антииммуноглобулина, соединенного с флуоресцином. ASC III увеличивал синтез коллагена 3 и не вызывал изменений в структуре фибропластов и их пролиферации.
Исследование дозозависимости эффекта проводили при добавлении к культурам фибропластов раствора, содержащего 10, 20 и 40 мг/л ASC III, с последующей инкубацией в течении 72 часов и радиоиммунным исследованием. Оптическая плотность, отражающая количество клеток, регистрировалась постоянно. Сравнение контрольных культур (смесь клеток без добавления ASC III) и культур с различными концентрациями ASC III показало, что увеличение синтеза коллагена 3 после аппликации ASC III связано с повышением синтетической активности фибробластов, а не с их пролиферацией.
Количественное определение коллагена 3 после активации фибробластов проводили при помощи радиоиммунного анализа. После 48 часов инкубации определяли содержание коллагена в культурах с добавлением ASC III и в контроле. В контрольной группе коллаген 3 составлял 27%, а коллаген 1 - 73%. В культу рах с ASC III коллаген 3 составлял 59%, а коллаген 1 - 41 %. ASC III увеличивает синтез коллагена 1 и 3, но в основном действует на синтез коллагена 3, соотношение коллаген 3/коллаген 1 +3 напоминает таковое в молодых фибробластах.
В исследованиях ex vivo использовали биоптаты, полученные при пластических операциях на лице. Готовили срезы кожи, которые помещали в чашки с питательной средой. Образцы инкубировали 15 дней. За исключением контрольных, все образцы обрабатывали раствором ASC III каждые 3 дня. По окончании инкубации все образцы замораживали и готовили из них срезы для иммунологического и гистологического исследования. На срезах, которые обрабатывались ASC III 5, 10 и 15 дней, после реакции с моноклональными антителами к коллагену III обнаружена флюоресценция, возраставшая в зависимости от длительности инкубации. Контрольные срезы после 15 дней инкубации не отличались от контрольных на начальных стадиях. На гистологических срезах кожи после 5 дней применения ASCIII увеличивается толщина эпидермиса, роговой слой становится хорошо различимым. После 15 дней толщина эпидермиса увеличивается в 2 раза.
Исследования in vivo:
У 6 здоровых пациенток (средний возраст 50 лет) с истонченной, сухой кожей и множественными морщинами после нанесения на кожу геля, содержащего 5% ASC, в течение 27 дней обнаружено увеличение эластичности кожи на 25% по сравнению с контролем.
У добровольца в возрасте 44 лет под местной анестезией брали образцы кожи - контрольный и через 3 недели после ежедневного нанесения крема, содержащего 5% ASC III. На гистологических препаратах кожи до и после применения крема, содержащего 5% ASCIII, наблюдали значительное утолщение эпидермиса и сосочкового слоя дермы.
В нашей клинике 6 здоровых пациенток (средний возраст 49 лет) ежедневно наносили на кожу лица и шеи гель, содержащий 5% ASC III, в течение 15 дней. Отмечено повышение эластичности кожи на 20% и значительное уменьшение глубины мелких и средних морщин.
Таким образом, на основании приведенных данных, можно считать целесообразным применение препаратов, содержащих ASC III, для профилактики старения кожи, повышения эластичности кожи и коррекции средних и мелких морщин.